Metodologija skupljanja i skladištenja uzoraka fitopatogenih gljivica i oštećenih biljaka

Prikupljanje i skladištenje uzoraka oštećenih biljaka i gljivica

Uzorci biljaka s dobro definiranim znakovima bolesti i njihovih patogena podliježu sakupljanju. Zeljaste biljke ubiraju se u cijelosti, uključujući cvijeće, plodove i korijenje - s drveća i grmlja - uglavnom grane s lišćem. Obično se sakupljaju dijelovi biljaka koji imaju znakove oštećenja u obliku plaka, pjegavosti, jastučići, oteklina, deformiteta, čireva itd., Kao i biljke bez vidljivih znakova parazita, ali isušivanjem ili s naglim drobljenjem lišća.

Uzorci bolesnih biljaka prikupljaju se od klijanja do berbe. Predmeti fitopatoloških istraživanja trebaju biti biljke koje rastu u polju, vrtu, povrtnjaku, livadi i šumi. Također je potrebno ispitati nerazvijene zemljišne parcele - djevičansko tlo, oborine, močvare i grmlje, jer su mnoge divlje biljke posredni domaćini i nositelji bolesti kultiviranih biljaka. U isto vrijeme treba proučavati prezimljene dijelove biljaka - na njima mogu ostati faze zimovanja (savršene i nesavršene) mnogih patogena koji su izvor nove infekcije na početku vegetacijske sezone.

Zimi je poželjno prikupiti pogođene dijelove biljaka prilikom pregleda vrtova, kao i spremišta povrća i sadnica.

Da bi se postigla sporulacija od sklerotije, nerazvijene peritezije, raznih stroma i drugih oblika gljivica koji ne stvaraju spore, zajedno s dijelovima pogođenih biljaka, M. K. Khokhryakov (1969) preporučuje njihovo stavljanje u Klebanove kasete od zime do zime. Potonji su minijaturni kompakti, na drveni okvir na koji se vuče mreža kaprona ili nehrđajuće žice. Ispitni uzorak (lišće, stabljika i dr.) Stavlja se u kasetu s 2 okvira. Između polovina dvostruko presavijenog jednoslojnog filtrirnog papira, zajedno s naljepnicom napisanom na pergamentu jednostavnom olovkom, vezana je kaseta i ostavljena na površini tla do proljeća. Važno je položiti kasetu tako da je gljiva u njoj izložena svim prirodnim čimbenicima: vlaženju i sušenju, smrzavanju i odmrzavanju, insolaciji i zamračenju itd..

Za prezimljavanje u prirodnim uvjetima gljiva se stavlja u obliku čistih kultura u epruvete, od kojih su pamučni čepovi omotani pergamentnim papirom ili tragovima, gornjim krajem zategnuti gumom. U drugim slučajevima, snopovi zeljastih biljaka ostavljaju se za zimovanje, objesivši ih s letvice.

Uzorci pogođenih biljaka odmah nakon sakupljanja stavljaju se u botaničku mapu ili mrežu i odvajaju jedan od drugog filtrom ili novinskim papirom. Ako su uzorci pažljivo izravnjeni, oni koji se ne mogu ugurati u botaničku mrežu (grane, gomolji, plodovi itd.) Su zamotani u papir. Svaki uzorak mora biti opremljen naljepnicom koja označava mjesto i datum sakupljanja, vrstu i sortu biljke, kao i naziv sakupljača.

Ako su uzorci namijenjeni herbariju, tada se stavljaju u balirku, prethodno odvojene jedna od druge slojem papir za oblaganje. Papir se oslobađa vlažnim papirom koji se vlaži. U slučajevima kada se uzorci ne mogu sušiti (sočno voće, korijenski usjevi, itd.), Oni su fiksirani u očuvanju tekućine. Takve tekućine su alkohol (70.), formalin (5.), mješavina alkohola s formalinom, otopine natrijevog klorida (8-9.) Ili bakrenog sulfata (1.). Uzorci stavljeni u staklenu posudu izlivaju se s tim tekućinama..

Za dulje čuvanje postoji nekoliko recepata. Najčešća mješavina bakrenog sulfata (CuS04-5H20) - 180 g sa ubrzanim vapnom (CaO) - 180 g i vode - 22,7 litara. Bakreni sulfat se otopi preko noći u 2 L vode. Luk se ugasi u 20,7 litara vode i prođe kroz tanko sito. Ako nema vapna, tada možete uzeti 272 g gaziranog vapna Ca (OH) 2 i pažljivo sipati otopinu bakrenog sulfata u vapneno mlijeko. To daje najfinije suspendirane sedimente. Otopina se koristi odmah nakon pripreme..

Knop rješenje sastavljena od kalcijevog nitrata [Ca (N03) 2] - 0,5 g, kalijevog nitrata (KNO3) - 0,125 g, magnezijevog sulfata (MgS04-7H20) - 0,125 g, kalijevog fosfata (K2HPO4) - 0,125 g, željeznog klorida (FeCl3 ) 5. - 1 kap i destilirana voda - 1 l.

Glavni konzervans za muzejske uzorke čine formaldehid (40.) - 25 ml, alkohol (95.) - 150 ml i voda - 1 l.

Kako bi se očuvala zelena boja uzoraka, stavljaju se u kipuću mješavinu 1 dijela ledene octene kiseline zasićene kristalnim bakrenim acetatom i četiri dijela vode, kuhaju 1-2 minute dok se ne vrati zelena boja, a zatim pohranjuju u 5 mm otopinu formalin.

Druga zadovoljavajuća metoda je stavljanje materijala u 5. otopinu bakrenog sulfata na najmanje 6 sati i ne više od 24 sata. Potom se uzorci isperu vodom i uskladište u otopini sumporne kiseline (5-6302) - 2 ml sa 1 litrom destilirane vode.

Geslerov konzervans za obojeno voće čine ih cink klorid (50 g), 40% formaldehid (25 ml), glicerin (25 g) i voda (1 l). Za obojene gljive koriste se sljedeće formulacije: ako uzorak sadrži pigmente netopive u vodi - živin acetat (10 g), ledena octena kiselina (5 ml) i voda (1 l) - u prisutnosti pigmenata topljivih u vodi - živog acetata (1 g), neutralni olovni acetat (10 g), ledena octena kiselina (10 ml) i 90. alkohol (1 l) ili cink sulfat (25 g), 40. formaldehid (10 ml) i voda (1 l ).

Da bi se izbjeglo isparavanje tekućine, staklenke s fiksnim uzorcima zatvorene su mljevenim čepovima, a obični čepovi se napune parafinom. Na svaku staklenku pričvršćena je naljepnica..

Pripremaju se mikroskopski pripravci s laktofenolom i nekolom. Laktofenol s anilin plavom bojom služi kao glavni konzervans za trajne pripravke koji se mogu zalijepiti lakom za nokte (bolje je nanijeti nekoliko tankih slojeva). Prvi sloj mora biti bezbojni lak, inače boja iz laka prodire u laktofenol. Posljednji sloj asfaltnog laka trebao bi dati veliku čvrstoću. Zagrijavanje preparata prije nanošenja pokrivača ubrzava bojanje. Suhi praškasti materijal prvo treba navlažiti etil acetatom.

Necolovi preparati često se proizvode proučavanjem gljivica koje rastu na površini supstrata. Nekol ili sličan pripravak celuloznog acetata razrjeđuje se acetonom do konzistencije glicerola. Mala kap ove tekućine stavi se na koloniju gljiva i osuši - to obično traje 15-30 minuta. Tanki bezbojni film formiran s gljivicom u njemu, nakon konačnog sušenja uklanja se skalpelom i postavlja između dva pokrivača u čistom glicerinu.

Neke gljive tvore osjetljiv konidijalni aparat. Da bi se napravili dobri pripravci, koriste se staklene kulture. U ovom je slučaju vrlo važno promatrati uvjete sterilnosti i rad se vrši pod sterilnim Petrijevim posudama čija se površina obriše alkoholom, a svi instrumenti, pokrivači i tobogani su temeljno sterilizirani.

Da bi se stvorili blokovi kulture na staklenim toboganima, komad veličine 7 mm2 izrezan je iz agara u Petrijevim posudama, inokuliran je minimalnim brojem spora sa svake strane, prekriven poklopcem i postavljen u mokru komoru (uređaj kamere opisan je u nastavku). Kada kultura dostigne zrelost, dio spora i nosivih struktura spore se pričvršćuju na staklo i poklopac stakala. Blok agarja uklanja se i pripravlja se dodavanjem uzoraka laktofenola sa strukturama gljivice na staklenim toboganima i prekriva se poklopcem koji je fiksiran. Izbjegavajte zagađenje zraka pažljivim grijanjem.

Način korištenja pokrivača predviđa rast gljivice u njihovom središtu. Da biste to učinili, napunite Petrijevu posudu prikladnim medijem i ostavite da se smrzne. Zatim napravite dva dijametralna ureza agara pod pravim kutom, obrezanim skalpelom. Rezultirajući trokut od agar podiže se, a ispod svakog od njih, s rubova, stavljaju se spaljeni pokrivači, koji se zatim zamjenjuju. Šalica je okrenuta i raspored čaša, vidljiv kroz čašu šalice, je okružen voštanom olovkom, a u sredini su četverokutni presjeci, olovki vezani stranicama 6-8 mm. Zatim se šalica ponovno preokrene, nepotrebni komadići agara se izrezuju i uklone, dok okruženi kvadrati sjaje kroz agar. Medij se inokulira i ploča se stavlja u inkubator. Konačno, gljiva raste i širi se po otvorenoj površini svake čaše, kao što se može vidjeti pod dvogledom. Uz dovoljno širenja gljivice, pokrivači se uklanjaju rezanjem okolnog agara (oštećenje hijefa, ako je potrebno) i priprema se na uobičajen način.

Ako je potrebno poslati svježe uzorke, postupite na sljedeći način: odmah nakon sakupljanja stavljaju se u takve uvjete da se ne oštete na cesti. Stabljike i reznice šalju se u svježem, blago vlažnom mahovinom, plodovi se zamotaju u papir i prenose strugotinom itd. Mali uzorci šalju se u papirnate vrećice. Ne možete koristiti plastični film za dugotrajno skladištenje i prijenos uzoraka, jer vrećica takvog materijala stvara puno vlage i uzorci brzo trunu..