Mediji kulture i očuvanje kultura fitopatogenih uzročnika

Za čiste kulture gljiva - fakultativni saprofiti i fakultativni paraziti, održavajući njihovu održivost u svrhu daljnjeg proučavanja, koriste se različiti hranjivi mediji. Ti se mediji razlikuju između krutih i tekućih poznatih i nepoznatih kemijskih sastava, prirodnih i umjetno pripremljenih. Izbor određene vrste hranjivih supstrata ovisi o potrebama organizma gljiva i ciljevima ispitivanja. Na primjer, prilikom proučavanja imuniteta biljaka kako bi se procijenila otpornost biljke domaćina na otrovne tvari patogena i učinak njegovog oslobađanja na rast patogenih oblika, potrebno je dobiti obilnu sporulaciju.

U postupku eksperimentalnog rada odabrani su određeni mediji. Gljiva se sije istovremeno na različite podloge u središtu Petrijeve posude (trostruko) i održava se na temperaturama optimalnim za njen razvoj. Promatranja se provode tijekom 12-15 dana nad rastom i razvojem gljive (energija rasta, početak i priroda sporulacije, gustoća micelija, itd.), Što je rezultiralo odabirom najprikladnijeg medija. Kada se koriste standardni sintetički mediji, njihov se sastav može mijenjati dodavanjem i isključenjem različitih kemijskih sastojaka.

Često je potrebno pronaći okruženje u kojem gljiva raste i razvija se bolje nego u prirodi. To se može postići zahvaljujući činjenici da se nakon sterilizacije u okolišu konkurentni mikroorganizmi uništavaju, a njegove sastavne tvari prolaze duboke biokemijske promjene koje doprinose boljoj apsorpciji nekih gljivica. Obično su to agarni mediji s decokcijom ili infuzijama (ekstraktima) iz biljke domaćina ili stabljike djeteline. Dakle, 100 g svježih ili 50 g osušenih organa koji se hrane biljkama gljiva uzimaju se u 1 litri vode. Masa se drobi, kuha jedan sat, prvotni volumen tekućine se vraća, filtrira, nakon čega se dodaje 2-2,5 agar-agar, otopi i sterilizira (M. K. Khokhryakov, 1969).

Tijekom uzgoja gljivica koje parazitiraju na drvenim biljkama, I. I. Miikevich koristio je prirodne hranjive podloge pripremljene prema ovom receptu. Fino sjeckane grane određenih vrsta drveća (200 g) sipaju se vodom (1 L) i drže 12 sati na 80 ° C, nakon čega se infuzija filtrira i dodaje agar-agar (2,5). Zatim se medij dva sata sterilizira tekućom parom u Kochovom aparatu. U posebnim studijama pripravljeni su ekstrakti različitih sorti, koje su koncentrirane (1 u smislu suhe tvari) sukcesivnim uzastopnim razrjeđivanjem. Moguće je koristiti slična prirodna okruženja u većoj koncentraciji.

Za određene sustavne skupine patogenih gljivica mnogi su istraživači odabrali prirodne hranjive supstrate i identificirali podloge s poznatim kemijskim sastavom. Dakle, eksperimentalno je utvrđeno da je vrsta iz roda Fusarium dobro rastu na kuhanim rižinim zrnima - gljivama roda Piricularia razviti obilnu sporulaciju na agarskom mediju s decokcijom pšeničnih zrna ili korijenskih kultura mrkve. Sastavi krutih hranjivih podloga za pojedine vrste i skupine gljiva prikazani su u tablici 20.

Prilikom pripreme medija, treba imati na umu sljedeće okolnosti:

1. gljivice obično rastu bolje u okruženju bogatom ugljikohidratima, ali uzgajanjem njih na takvim medijima može dugotrajno smanjiti sporaciju-
2. većina gljiva preferira blago kiselu reakciju (pH 6,0-6,5), dok bakterije preferiraju neutralnu (pH 7,0) ili blago alkalnu-
3. ugljikohidrati i bjelančevine u kiseloj i alkalnoj otopini se prilikom zagrijavanja uništavaju, pa ih treba umjereno sterilizirati ili dodavati odvojeno-
4. agar se otopi u pola norme vode 1-2 sata, a hranjive tvari u preostaloj vodi, nakon čega se komponente pomiješaju-
5. agar se ne stvrdne u vrlo kiselom ili alkalnom okruženju-
6. pepton se uglavnom može izuzeti iz medija za gljive-
7. kuhana voda treba preferirati destiliranu, jer prva sadrži korisne elemente u tragovima za gljivice roda Phytophthora bolje koristiti destiliranu vodu-
8. za medije koji sadrže biljni materijal, prethodno se uvlači na niskim (agar krumpira) ili visokim (agar krompir-dekstroza).

U nekim slučajevima (pri proučavanju toksične sekrecije patogena, enzima i sl.) Koriste se tekući hranjivi mediji. Na primjer, toksični učinci sekreta Deuterophoma tracheiphila proučavano je na mediju pripremljenom inzistiranjem na mljevenim izdancima biljke domaćina (200 g izdanaka na 100 cm3 vode). Za gljive smuti preporučuje se sljedeći sastav: 0,03 g K2S04 - 0,01 g NH4NO3 - 10,0 g dekstroze (ili maltoze) - 0,01 g CaCl2 - 0,01 g Mga (P04) 2-4H20 i vode 100 cm3.

Za razne studije o biologiji gljivica i otpornosti biljaka, javlja se potreba za dugotrajnim skladištenjem čistih usjeva. Međutim, nakon skladištenja, niz patogenih gljivica mijenja morfološke i kulturne karaktere, a ponekad gubi i patogena svojstva. Stoga je prije provođenja pokusa s gljivama uzetim nakon dugotrajnog skladištenja u čistoj kulturi potrebno obnoviti njihovu patogenost provođenjem prolaza kroz biljku domaćina.

Sastav hranjivih medija za uzgoj fitopatogenih gljivica

Široko rasprostranjen način održavanja čistih kultura gljiva je njihovo periodično ponovno zasijavanje na svježim hranjivim medijima. Većina usjeva se sadi 2-3 puta godišnje. Prilikom presađivanja uglavnom se prenose spore, a u nespornim oblicima micelije s marginalne zone kolonije.

Prerada se vrši u dva ponavljanja, a 3 primjerka svake kulture gljiva ostavljaju se za pohranjivanje, brojanje i ponovni ponovni završetak. Jedna od novih reseding koristi se samo za buduću ponovnu ponovnu obradu, a druga - za probir tijekom eksperimentalnog rada.

Za dugotrajno skladištenje gljiva, bolje je koristiti škrobne i celulozne medije bez šećera. Na sterilnom prirodnom materijalu dobro su sačuvane brojne polu-saprofitne gljive (na primjer, gljive iz roda Cytospora na granama biljke domaćina) - u ovom slučaju je najprikladnija temperatura od 4-5 ° C. Duboko hlađenje (približno - 20 ° C) zadovoljava održivost gljiva vrlo dugo.

Kulture gljiva mogu se konzervirati i pod mineralnim uljem, nakon liofilizacije (sušenjem smrzavanjem pod smanjenim tlakom) i pod tekućim dušikom u ampulama. Ako gljive mogu izdržati potpunu obradu, tada će biti održive 10 i više godina. Međutim, uporaba ovih metoda zahtijeva glomaznu i skupu opremu..

U normalnim uvjetima, skupljanje gljiva najbolje je čuvati u širokim epruvetama u kosom mediju za rast, zatvorenim pamučnim čepovima. Međutim, pripazite na oštećenja usjeva krpeljima (vrsta rada) novajlijaglyphus i Tarsonemus), posebno u južnim krajevima i ljeti u umjerenoj klimi. Nalazeći se u epruveti, tikvicama i petrijevim jelima, oni jedu usjeve, zaraze ih bakterijama i kontaminiraju..

Postoje brojni načini za rješavanje ovih grinja. No, prije svega, potrebno je promatrati opću higijenu, poduzeti mjere kako insekti ne bi uletjeli u laboratorij, budite oprezni pri radu s organskim materijalom i s tlom. Sav se novi materijal mora pažljivo pregledati po primitku. Ako je moguće, treba postojati odvojene prostorije za čisti i prljav materijal..

Dovoljno gusti pamučni čepovi su obično nepropusni za krpelje, a dovod zraka u kulturu nije poremećen. Za veće jamstvo, plute se mogu tretirati otrovima koji štetno djeluju samo na krpelje. Također se preporučuje upotreba papirnog papira. U tu svrhu, nakon začepljenja oboda čepa, oni izgaraju u plamenu plamenika i prekrivaju ga ljepljivom toplom želatinom s bakrenim sulfatom (bakreni sulfat - 20, želatina - 20, voda - 60). Zatim se ovaj premaz fiksira na kraju cijevi s papirnim papirima. Nakon sušenja višak papira je spaljen. Takav je papir vrlo tanki s porama koje sprječavaju prodiranje grinja, pružajući pristup zraku. Na isti način možete začepiti bočice, ali gumene čepove prije upotrebe morate ukloniti, a papir od papira sterilizirati..

Također je korisno zatvoriti sve tikvice, čaše i epruvete kontaminiranim materijalom nakon primitka papira.

Sve kulture trebaju biti numerirane i registrirane na posebnim karticama koje bilježe broj i naziv kulture, gdje i gdje je dodijeljen, datum dodjele, način izoliranja, naziv medija koji se koristi za ponovnu ponovnu ponovnu obradu, rezultate promatranja rasta patogena u čistoj kulturi i zabilježeno značajke.